【產品名稱】禽liu感通用/新城疫病毒(AIV-U/NDV)核酸PCR試劑盒
【包裝規(guī)格】 50T/盒
【產品方法】雙重實時熒光PCR法
【預期用途】
適用于禽liu感通用/新城疫病毒(AIV-U/NDV)檢測，可用于臨床禽liu感通用/新城疫病毒(AIV-U/NDV)感染的輔助診斷，但不作確診使用。
禽liu感通用/新城疫病毒(AIV-U/NDV)核酸PCR試劑盒【檢驗原理】
本試劑盒采用TaqMan 探針法實時熒光 PCR 技術，設計一對禽liu感通用/新城疫病毒(AIV-U/NDV)特異性引物，結合一條特異性探針，利用相應儀器對PCR 過程進行實時監(jiān)測，實現檢測結果的定性分析，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。
【主要組成成份】
反應液、酶液、陽性質控品、陰性質控品。
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融次數不超過 5 次，有效期 12 個月。
【適用儀器】
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。
【保存和運輸】上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，標本運送應采用 2~8℃冰袋運輸， 嚴禁反復凍融。
【使用方法】
1 樣品處理（樣本處理區(qū)）
1.1樣本前處理
血液、體液和棉拭子樣本取100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。
1.2 核酸提取
推薦采用核酸提qu或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進行核酸提取，請按照試劑說明書進行操作。
2.試劑配制（試劑準備區(qū)）
根據待檢測樣本總數，設所需要的PCR 反應管管數為 N（N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照；反應管 數每滿 10 份，多配制 1 份），每測試反應體系配制如下表：
試劑 | RP反應液 | 酶液 |
用量（樣本數為N） | 20μL | 1μL |
將混合好的測試反應液分裝到PCR 反應管中，21μL/管。
3.加樣（樣本處理區(qū)）
將步驟1 提取的核酸、陽性質控品、陰性質控品各取 4μL，分別加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻，短 暫離心。
4.PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）
4.1將待檢測反應管置于熒光定量PCR 儀反應槽內；
4.2設置好通道、樣品信息，反應體系設置為25μL； 熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光，選擇 None 即可。
4.3推薦循環(huán)參數設置：
步驟 | 循環(huán)數 | 溫度 | 時間 | 收集熒光信號 |
1 | 1cycle | 42℃ | 20min | 否 |
2 | 1cycle | 95℃ | 10min | 否 |
3 | 40cycles | 94℃ | 15sec | 否 |
55℃ | 30sec | 是 |
5.結果分析判定
5.1結果分析條件設定
設置Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結果分析，當曲線出現整體傾斜時，根據分析后圖像 調節(jié) Baseline 的 start 值（一般可在 3~15 范圍內調節(jié)）、stop 值（一般可在 5~20 范圍內調節(jié)），以及 Threshold 的 Value 值（上下拖動閾值線至高于陰性對照），重新分析結果。
5.2結果判斷
陽性：檢測通道Ct 值≤35，且曲線有明顯的指數增長曲線； 可疑：檢測通道 35值≤38，建議重復檢測，如果檢測通道仍為 35值≤38，且曲線有明顯的增長曲線， 判定為陽性，否則為陰性； 陰性：樣本檢測結果 Ct 值>38 或無 Ct 值。
6.質控標準
陰性質控品：Ct>38 或無 Ct 值顯示； 陽性質控品：擴增曲線有明顯指數生長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。
7.檢測方法的局限性
1. 樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關；
2. 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現假陽性結果；
3. 陽性對照、擴增產物泄漏，會導致假陽性結果；
4. 病原體在流行過程中基因突變、重組，會導致假陰性結果；
5. 不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結果；
6.試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現假陰性或定量檢測不準確的結果； 7.本檢測結果僅供參考，如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。
【注意事項】
1.所有操作嚴格按照說明書進行；
2.試劑盒內各種組分使用前應自然融化，完quan混勻并短暫離心；
3.反應液應避光保存；
4.反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；
5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；
6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行，以免交叉污染；
7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；
8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。
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